Transmisión de la tuberculosis bovina Fuente: FEDEGAN, carta edición Nº 78

El control de la enfermedad en el hombre, requiere del control y erradicación en las especies animales.

Existen métodos directos e indirectos para diagnosticar la tuberculosis bovina. En los primeros se determina la presencia del agente en el huésped, y en los segundos se determina la respuesta del huésped al agente, ya sea esta de tipo celular o humoral.

En las plantas de sacrificio la inspección de canales es una actividad básica en la vigilancia epidemiológica de la tuberculosis bovina, ya que es allí donde se detectan en los bovinos las lesiones macroscópicas que se ven a simple vista. La presencia de tumoraciones en los diferentes órganos. El foco de necrosis presenta una coloración amarillenta con apariencia caseificada (como queso) y es posible detectar la presencia de calcio; durante la necropsia se perciben como pequeñas granulaciones blanquecinas que crepitan al cortar con el cuchillo. También puede observarse exudado de apariencia purulenta en meninges.

Ganglios medianísticos medios aumentados de tamaño y múltiples tubérculos pequeños de tipo caseoso (Fuente :Internet)

 A partir de estas muestras se aplican las siguientes técnicas microscópicas de diagnóstico:

1) Coloración de Ziehl Nielsen: (ácido alcohol resistente), identifica la presencia de bacilos acido alcohol resistentes, no formadores de esporas inmóviles y no encapsulados, características del género Mycobacterium. Los bacilos se observan de color rojo brillante sobre un fondo azul.

2) Histopatalogía, proporciona resultados presuntivos. En cualquiera de las formas en que se presenta la tuberculosis, esta se caracteriza por la formación de granulomas. Se pueden detectar bacilos ácido alcohol resistentes libres en el citoplasma de los macrófagos, histiocitos y células gigantes de la lesión granulomatosa.

Figura 1. Granuloma tuberculoso

3) El cultivo bacteriológico proporciona el diagnóstico definitivo de la enfermedad. Las micobacterias son aerobios obligados que crecen en medios sintéticos simples, pero para el aislamiento primario a partir de muestras clínicas se requiere de un medio más complejo como el medio Löwestein-Jensen, o como el medio Middlebrook. El cultivo dura de 3 a 6 semanas en desarrollarse, las colonias son pequeñas, secas y con aspecto escamoso.

El material requerido para aislar el M. bovis debe ser ganglios, pulmones, hígado, bazo, riñón, pleura o cualquier otro tejido donde se aprecien las lesiones características.

Evalúan la respuesta mediada por células. Contempla las pruebas de intradermo reacción con PPD bovina que es el método más eficaz y que ha servido para erradicar la tuberculosis en numerosos países. El PPD bovino es un derivado proteico purificado producido a partir de cultivos inactivados de Mycobacterium bovis. Se dispone de tres pruebas:

1. Prueba Tuberculinica Cervical Simple: consiste en la inoculación intradérmica de 0,1 ml de PPD bovina, previa limpieza con un producto no-irritante, en el tercio medio del cuello, previo corte de pelo a máquina o tijera en el lugar de inyección, en una superficie de 5 a 6 cm. La lectura se hace a las 72 horas (más o menos 6 horas). Las reacciones se consideran negativas cuando no se observa ni palpa ningún cambio en la piel del sitio de aplicación y reactoras cuando es visible y/o palpable un engrosamiento de 4-5 mm.
2. Prueba Tuberculinica Ano-Caudal: esta prueba se realiza en el pliegue ano-caudal interno a unos 6 cm. de la base de la cola y en el en el tercio medio del pliegue ano-caudal interno. Esta zona es menos sensible a la tuberculina que la piel del cuello. Se inyectan 0.1 ml de PPD bovina, previa limpieza con un producto no-irritante. La lectura se hace a las 72 horas (más o menos 6 horas). Las reacciones se consideran negativas cuando no se observa ni palpa ningún cambio en la piel del sitio de aplicación y reactoras cuando es visible y/o palpable un engrosamiento de 4-5 mm.
3. Prueba tuberculínica comparativa: la prueba intradérmica comparativa se utiliza para la realización de un diagnostico diferencial entre animales infectados por Mycobacterium bovis y aquellos sensibilizados a la tuberculina por exposición a otras micobacterias. Esta prueba consiste en la inyección de tuberculina bovina y tuberculina aviar, previa limpieza con un producto no irritante, en diferentes puntos del cuello y en la subsiguiente evaluación de la respuesta transcurridas 72 horas. Para esta prueba comparativa la dosis de tuberculina no debe ser inferior a 2.000 UI de tuberculina bovina ni a 2.00 UI de tuberculina aviar. La distancia entre ambas inyecciones debe ser de aproximadamente 12 a 15 cm. Un animal se considera positivo cuando en la zona de inyección de la tuberculina bovina hay una reacción de 4mm mayor que la tuberculina aviar y se considera dudoso cuando esa reacción es entre 1 y 4mm mayor que la tuberculina aviar. El animal es negativo cuando no hay reacción o cuando la reacción es igual o menor que la tuberculina aviar.

En todas las pruebas de intradermo reacción, la inyección se realiza introduciendo la aguja oblicuamente en la dermis e inyectando la dosis de tuberculina. Después se comprueba que la inyección ha sido bien realizada detectándose al tacto una elevación cutánea (habón) en el lugar de la misma. Estas pruebas se realizan en forma directa sobre el animal, requieren movilizar dos veces a éstos (una para la aplicación y otra para la lectura), y no se pueden repetir antes de los 60 días debido a que el animal se sensibiliza a la PPD y los resultados serán siempre negativos.

Debe considerarse que estas pruebas:

1. Detectan animales con formas tuberculoides. Es decir, pueden ser negativos a la misma animales con lesiones generalizadas o con pequeños nódulos pero exudativos y con elevado número de bacilos en los mismos. Estos animales, tradicionalmente llamados "anérgicos" (no reaccionan), son los menos numerosos en un rebaño de bovinos infectados, pero son los más peligrosos en cuanto a contagio y difusión de la infección se refiere.
2. Durante las primeras semanas de la infección, la prueba puede ser negativa.
3. Animales con lesiones mínimas y únicas (tuberculoides) son intensamente reaccionantes. En una explotación con niveles de positividad a la tuberculinización simple (PPD bovina) muy elevada (20% o más) y con reacciones intensas en el punto de inoculación, no se debe pensar en reacciones cruzadas con otras micobacterias del complejo Mycobacterium avium (M. avium avium, M. avium paratuberculosis, etc.) o ambientales (M. phlei, etc) sino en infección tuberculosa.
4. En explotaciones infectadas con estas últimas micobacterias (grupo M. avium y ambientales), por ejemplo con M. avium paratuberculosis, los reaccionantes a la PPD bovina son escasos y en general muestran reacciones débiles, inferiores a los 4 mm.

Por estos inconvenientes se vienen realizando esfuerzos a nivel mundial para obtener pruebas de diagnóstico alternativas, resultando en algunos casos muy costosas y de difícil ejecución. Esta técnica, que tiene más de 100 años de uso y que ha sufrido muchas variaciones a través del tiempo, es aún hoy la prueba oficial de muchos países desarrollados como los de la Comunidad Económica Europea y USA.

Otras pruebas disponibles para el diagnóstico de la tuberculosis que se han desarrollado y que estudian la respuesta de tipo celular detectando la presencia de citocinas circulantes incluyen:

1. la prueba de gamma-Interferón, que se realiza con sangre completa y tiene mayor sensibilidad y especificidad que la intradermo reacción. Se emplean los mismos antígenos (PPD) y detecta el mismo grupo de animales infectados. Las ventajas con respecto a la intradermo reacción es que el animal se maneja sólo una vez. Los inconvenientes son su costo y la necesidad de procesar la sangre inmediatamente después de su extracción.
2. Prueba de ELISA indirecto, para la detección de anticuerpos séricos. Posee baja sensibilidad, pero es muy fiable en la detección de vacas "anérgicas" a las pruebas de la tuberculina y gamma-Interferón.
3. Una importante alternativa es la identificación del genoma bacteriano, mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la amplificación de secuencias génicas, Su eficacia radica en la rápida identificación de patógenos de difícil cultivo. En ese contexto, el desarrollo de un procedimiento que identifica directamente M. bovis en muestras de tejido y secreción proveniente de animales tuberculosos debe ser el objetivo de todos los países. La incorporación de estos procedimientos para el diagnóstico de tuberculosis  animal y la genotipificación  es de importancia por cuanto países desarrollados ya aplican en forma rutinaria dichas metodologías como apoyo a las investigaciones diagnósticas y epidemiológicas, necesarias en programas de vigilancia y erradicación.

Reacción positiva a la tuberculina

La experiencia acumulada indica que la enfermedad es controlable y erradicable, mediante acciones sistemáticas orientadas a la detección, identificación y eliminación de animales positivos.

En Venezuela, en los últimos años, los controles sanitarios en los rebaños, particularmente los referidos a enfermedades como la tuberculosis, brucelosis y leptospirosis se han deteriorado. Esta situación ha traído como consecuencia el incremento de casos de enfermedades en animales y humanos. En los actuales momentos es difícil ubicar estadísticas que permitan una cuantificación real del problema en la ganadería bovina, con el fin de recomendar los programas de erradicación y/o control necesarios, que en todo caso deben partir de un conocimiento de la prevalencia por zonas para fijar prioridades.

Investigaciones recientes, utilizando la prueba de inoculación intradérmica de tuberculina en la región ano-caudal, para la detección de inmunidad celular contra tuberculosis, se determinó una prevalencia de 2,6% en el Zulia y de 2,0% en Monagas.

Los programas de control y erradicación se basan en la aplicación de la prueba de tuberculina a todo el rebaño. Una vez que ha sido diagnosticado como positivo el predio, se realizan evaluaciones cada seis meses, los animales reactores positivos son eliminados en forma inmediata para evitar la diseminación a otros bovinos.

Para detectar un predio positivo se deben hacer pruebas de rebaño que incluyan animales de 24 meses o mayor, incluso las vacas secas de las fincas lecheras. El tamaño de la muestra animal se puede determinar mediante la fórmula para estudios de prevalencia de la OPS-OMS que establece que para detectar la presencia de hatos seropositivos, se recolectaran como mínimo 30 muestras de suero en cada finca, tomando en consideración los criterios siguientes: una población igual o mayor a 100 animales, una prevalencia esperada de 20% y un nivel de confianza de 95%. Este tamaño de muestra es el requerido para detectar, con 95% de confianza, al menos un animal positivo si la enfermedad concuerda con la prevalencia esperada. La fórmula para determinar el tamaño de la muestra es la siguiente:

n= [1- (1-a) 1/d ] [N-d/2]+1

donde

n= tamaño de muestra necesario

N= tamaño de la población

d= número de animales enfermos en la población

1-a= nivel de confianza deseado (probabilidad de encontrar al menos un animal positivo

Las estrategias de erradicación realizadas por países desarrollados, como Estados Unidos e Inglaterra, han utilizado programas de "test y sacrificio", los cuales demandan la aplicación de políticas gubernamentales que posibilitan al productor participar en este tipo de programas. Las campañas de control y erradicación se basan en la prueba de la tuberculinización simple (PPD bovina) pero existen varios casos en los que sería aconsejable incorporar además otras metodologías:

1. Explotaciones con porcentajes elevados y/o persistentes de reactores cada año. La posibilidad más factible es que esta situación sea debida a la presencia de animales "anérgicos" a la tuberculina, con gran capacidad de contagio. En este caso, se realizará conjuntamente con la tuberculina una prueba de ELISA para detectar Interferón gamma, eliminando los positivos a esta última prueba. La aplicación de esta sistemática durante 3 veces consecutivas en un año, garantiza la eliminación de la infección en la mayoría de los casos.
2. Explotaciones libres de tuberculosis en los últimos años y presencia en la última campaña de un porcentaje de animales positivos, generalmente con reacciones débiles. En este caso puede tratarse de un nuevo foco de infección tuberculosa o de una reacción cruzada con otras infecciones por micobacterias del complejo M. avium, generalmente M. avium paratuberculosis. En estos casos, se deberá realizar la tuberculinización comparada (PPD aviar y PPD bovina), acompañándose si se quiere del test de gamma-Interferón. No obstante, la realización de un test de ELISA entre los 15 y 20 días posteriores a la tuberculinización simple oficial, puede detectar sin error si se trata de infección tuberculosa. En el caso de sospecharse infección por M. avium paratuberculosis, tras la tuberculinización comparada o el test de ELISA, deberá procederse con la prueba de gamma-Interferón.

• Los animales que se deseen introducir a la finca (de otros predios de la región, del país o de fuera de éste), deben encontrarse certificados como negativos a través de la prueba caudal de tuberculina.
• Debe realizarse la prueba de PPD cada 6 meses para verificar que el predio sigue negativo.

• Establecer medidas de control de movilización para los bovinos que participen en eventos como exposiciones o remates. Todo bovino participante debe haber sido negativo a la prueba tuberculínica o proceder de un hato certificado como libre de la enfermedad.

La inspección veterinaria en mataderos y frigoríficos es una herramienta importante para la vigilancia epidemiológica de esta enfermedad. La detección diaria de lesiones en la faena permite determinar prevalencias actualizadas de zonas lecheras y áreas de crías bovinas. Un sistema de identificación de bovinos para localizar sus rodeos de origen (trazabilidad), cuando se observan lesiones de tuberculosis en frigorífico, permitiría detectar los rodeos afectados e iniciar medidas de control. 

La presencia de la TBC es indicativo de la difusión de la misma y de la necesidad de evaluar todos los predios para determinar la prevalencia en cada estado y controlarla. Es necesario que el Estado Venezolano retome el control de esta zoonosis y preste apoyo a las iniciativas privadas. Los sectores oficiales y privados deberán trabajar juntos. Habrá numerosas dificultades que deberán enfrentarse debido a las características de la tuberculosis, pero es la única forma de alcanzar un estatus sanitario aceptable para que la enfermedad no se transforme en una nueva barrera que impida la exportación de nuestros productos pecuarios.