Introducción    ^

El Laboratorio de Microbiología de Peces y Crustáceos de la Unidad de Sanidad Animal del CENAP/INIA está dedicado al estudio sanitario de especies acuícolas (truchas arco iris, tilapias, cachamas, camarones marinos y de agua dulce) silvestres y de cultivo en el país. Se implementan técnicas para la detección de portadores asintomáticos de virus y bacterias de importancia sanitaria, así como el diagnóstico de las enfermedades que los afectan, relacionados siempre con el ecosistema que los rodea.

Para ello se cuenta con una infraestructura adecuada y modernos equipos, bajo el manejo de personal altamente capacitado en el área, permitiendo el desarrollo de técnicas de diagnóstico eficaces, que contribuyen a optimizar la producción acuícola en el país y a mejorar la condición sanitaria de los productos ofrecidos.

La misión del laboratorio es realizar estudios virológicos y bacteriológicos en especies acuícolas silvestres y de cultivo a nivel nacional, con el fin de mejorar la explotación de estos rubros y llevar un control sanitario que contribuya a mantener la salud de las especies acuáticas y, en algunos casos, de los consumidores.

Desde su fundación, se ha manejado la visión de un laboratorio dotado con personal, recursos y herramientas tecnológicas de avanzada, convirtiéndolo en un laboratorio de referencia nacional e internacional, en el que se desarrollen líneas de investigación que contribuyan al aumento de la producción acuícola, con el logro de productos inocuos fáciles de comercializar nacional e internacionalmente.

Investigación sobre enfermedades de especies acuícolas     ^

Actualmente se ejecutan dos proyectos dentro de los programas de financiamiento del FONACIT:

• Identificación de patógenos en granjas acuícolas venezolanas e Inicio de estudios para su detección con técnicas moleculares (Agenda Pesca y Acuicultura).
• Detección de bacterias aerobias de importancia para la salud pública en el Lago de Valencia, Correlacionando su Identificación por PCR (Proyecto S1).

Las especies acuícolas son susceptibles a sufrir patologías relacionadas con múltiples agentes: virus, bacterias, hongos y parásitos, lo que se traduce en pérdidas económicas para los acuicultores y en posibles fuentes de propagación de infecciones en humanos.

Entre las patologías más frecuentes se encuentran: el síndrome de la septicemia hemorrágica bacteriana causada por bacterias como: Vibrio harveyi, Pseudomonas fluorescens, Aeromonas hydrophila, y Plesiomonas shigelloides y Yersinia ruckeri, algunas patologías de origen viral como polihedrosis nuclear por Baculovirus penaei, y parasitosis de importancia provocadas por Anachantorus spatulatus, Trichodina sp., todas observadas en ejemplares nacionales procesados en el laboratorio.

Actualmente en el laboratorio se estandarizan técnicas de biología molecular que permitirán optimizar el proceso de detección e identificación de las especies virales y bacterianas de importancia y el diagnóstico de enfermedades en peces y crustáceos cultivados. Así, la hibridación in situ ha permitido la identificación del ácido nucleico de Baculovirus penaei en hepatopáncreas e intestino de camarones marinos.

Por su parte, la reacción en cadena de la polimerasa ("PCR" por sus siglas en inglés) está siendo aplicada para detección de ácidos nucleicos específicos de especies bacterianas y virales.

En el laboratorio se efectúan dos tipos de actividad: monitoreo preventivo y actividades de diagnóstico situacional frente a la presencia de cualquier problema sanitario.

Laboratorio de Microbiología de Peces y Crustáceos, Unidad de Sanidad Animal, CENIAP-INIA, Maracay

En el Laboratorio se brinda capacitación con el objetivo de suministrar herramientas para la toma y envío apropiado de muestras al laboratorio, que será el encargado de ejecutar programas de determinación del estado sanitario y del diagnóstico en granjas acuícolas. La determinación del estado sanitario de una granja de cultivo acuícola debe estar basada en la inspección del sitio y en la toma de muestras para exámenes y estudios posteriores de laboratorio.

Esta labor requiere la recolección de especimenes muestras, acorde con patrones de tamaños definidos de muestreo, y que el procesamiento de los órganos se efectúe de acuerdo con métodos internacional y nacionalmente validados. Los cursos constan de clases teóricas y prácticas, complementadas con una salida de campo para visitar una granja productora de peces o crustáceos de la región central del país.

Dentro de los aspectos tratados en el curso se contempla:

1. Cómo se efectúa una anamnesis incluyendo el diseño del formulario respectivo y el registro apropiado de la información.
2. Técnicas para la toma de muestras sanguíneas.
3. Procesos de: medición, pesaje, examen externo e interno.
4. Preparación de los ejemplares para el transporte al laboratorio, bien sean: animales vivos, preservados o muestras procesadas en el campo.
5. Uso apropiado de soluciones estabilizadores del pH y antimicrobianos, en la toma y transporte de las muestras.
6. Procedimientos par la toma de la muestra para estudios:

• Bacteriológicos. Medios de aislamiento primario y técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
• Virológicos. Cultivo en líneas celulares y PCR.
• Parasitológicos. Preparados frescos, aplastamiento de órganos, revisión de contenido intestinal, etc.

La finalidad de las actividades de capacitación es crear capacidades y habilidades entre el personal de INAPESCA, profesionales encargados y otros empleados en las estaciones de cultivo acuícola, para la toma y envío apropiado de muestras para la evaluación del estado sanitario y el diagnóstico de enfermedades en acuicultura. De esta manera se brinda apoyo especializado para programas sanitarios en granjas de cultivo acuícola en diferentes regiones de Venezuela.

También se realizan acciones de capacitación para personal de granjas camaroneras, actividad comercial de alta rentabilidad económica en la cual, las enfermedades constituyen un factor limitante. Éste es un problema importante a nivel mundial, pues disminuye la eficiencia de los sistemas de cultivo y por ende la importación y exportación de semillas u otras fases. Existen ciertos riesgos que pueden afectar la calidad del producto y producir pérdida de competitividad en los mercados, como la presencia de elementos patógenos de naturaleza viral, bacteriana o fúngica, que a menudo se presentan sin explicación alguna y que pueden ser evitados si se llevan controles sanitarios adecuados y especializados. Por otro lado, se puede evitar el ingreso de patógenos de una región a otra y del exterior. En estas acciones de capacitación se busca crear habilidades y destrezas en el personal de campo y de otras instituciones interesadas en la toma de muestras y el diagnóstico de las principales que afectan las explotaciones camaroneras.

Otra área en la cual se brinda capacitación es en el uso de PCR en el diagnóstico de enfermedades que afectan las especies de interés comercial (camarones, truchas y tillapias). La mejor manera de involucrar al participante en esta técnica, es el dictado de cursos teórico-prácticos, donde además de darle las bases teóricas necesarias, se afianzan los conocimientos junto con actividades prácticas. Por ello el curso consta de una parte teórica, donde se tratan puntos como:

• PCR como método de diagnóstico de enfermedades
• Principio de la PCR y la extracción del ADN
• Fundamentos de la RT-PCR
• Aspectos de validación del ensayo
• El laboratorio en PCR

La sesión práctica demostrativa, consta de los siguientes ensayos:

• Extracción del ADN
• Amplificación o aplicación de la técnica(manejo del termociclador)
• Detección del ADN en geles de agarosa

El laboratorio mantiene un programa de investigación y capacitación interactivo, incluyendo visitas a granjas acuícolas, para actividades prácticas y de toma de muestras, que luego son procesadas en el laboratorio. Así se asegura una relación directa con el productor y una transferencia y aplicación de los resultados de la investigación realizada. Adicionalmente se prestan servicios de diagnóstico microbiológico a solicitud de usuarios interesados.

Preparación y aplicación de reactivos y mezclas para la extracción de ADN.

Termociclador con muestras preparadas para la extracción y Gel de agarosa con bandas visualizadas de ADN.

 

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