Revista Digital del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias de Venezuela

 CENIAP HOY                                                                                                        
  Número 9  septiembre-diciembre  2005

Importancia biológica en la Multiplicación de las Líneas Celulares Estables: III. Tipos y líneas

 
Durán, R*; Valle. A**; Viña, X* y Mujica, B*.  

*Laboratorio Cultivos Celulares
INIA – CENIAP, Sanidad Animal

** Producción Animal. INIA-CENIAP

Cuando un cultivo proviene de células que han sido disgregadas de un tejido original tomado de un órgano de un animal recién sacrificado, reciben el nombre de Cultivo Primario, y al ser sometido a procesos de transformación se le confiere capacidad ilimitada de multiplicación, entonces recibe el nombre de Línea Celular.

En el instante en que las células comienzan a dividirse en la placa, su número se incrementa hasta ocupar todo el espacio y una vez que alcanza la confluencia en el cultivo es cuando muchas líneas celulares expresan sus aspectos más característicos. Es en este estado, de afinidad morfológico y fisiológico, se recomienda resembrar en una nueva placa. También, es el momento en  que se detiene el crecimiento y se hace necesario dividir, replaquear o propagar las células.

En el caso de células en cultivo primario el factor de dilución de un pase al siguiente no suele ser superior de 1/2 a 1/5. En el caso de líneas celulares establecidas la dilución puede ser tan elevada como 1/100 o 1/1000, pero la habitual es de 1/10. El caso más extremo serían los procesos de clonaje en los que se siembran en pocillos (multiwell de 96 pocillos) una única célula.

El crecimiento de las células en cultivo primario prosigue a lo largo de una serie de generaciones o pases característicos de cada tipo celular y en condiciones de cultivo. Así los hepatocitos adultos no se establecen más que como cultivos primarios, mientras que las células endoteliales de cordón umbilical humano (HUVEC) permanecen en cultivos de 3 a 9 pases y los fibroblastos dérmicos humanos pueden superar los 20 pases. Sin embargo, al final, todas ellas entran en una fase de senescencia, con acumulación de numerosas anormalidades y perdida de funciones especializadas, que conducen a la muerte del cultivo.

Sólo ocasionalmente un cultivo primario se mantiene durante más generaciones de las esperadas. Esto es debido a la aparición de un cultivo de células “inmortales”, que forman líneas estables o cultivos celulares permanentes. La razón de la inmortalización de estas células es en la mayor parte de los casos desconocida, pero se incrementa  mediante infecciones virales, tratamientos con mutágenos y otras causas, por lo que se presume deben estar relacionadas con la pérdida espontánea o inducida por un tratamiento de las vías de control celular.

Las investigaciones al respecto están demostrando que la capacidad de un cultivo celular primario, para establecerse como línea estable, está relacionado directamente con su variabilidad genética . Así,  líneas celulares que nunca se establecen como estables se mantienen euploides (poliploide: que difiere del número básico –2n- de genomas), como es el caso de fibroblastos humanos, de pollos y la glia humana, mientras que otras líneas frecuentemente se convierten en aneuploides (células con un número cromosómico que no es múltiplo exacto del número monoploide), y se transforman en líneas celulares continuas (se derivan de tejidos normales o neoplásicos y se caracterizan por su habilidad para ser propagados in vitro indefinidamente) con  mayor frecuencia, como es el caso de las células epidérmicas.

El cultivo de células no presenta las mismas dificultades, independientemente del tipo de célula que se trate. Hay grandes diferencias cuando se relacionan fundamentalmente con el grado de diferenciación del tipo celular. Así pues, en general, se puede establecer como norma que una línea celular será tanto más fácil de establecer o cultivar cuanto más indiferenciada sea.

En la actualidad, los cultivos celulares son los más empleados fundamentalmente por la posibilidad de propagación, así como por las ventajas en la cuantificación, caracterización y repetibilidad de las muestras. A fin de compensar la ausencia de interacciones heterotípicas, se realizan desde hace algunos años cultivos mixtos con importantes éxitos.  

 

^	LÍNEAS CELULARES CONTÍNUAS

Están formadas por células que se diferencian genética y morfológicamente de las células de las cuales se originaron. Pueden provenir de células que se derivan de tumores o de un proceso de transformación de un cultivo primario mediante transfección con oncogenes (genes anormales del cromosoma, que alteran la estructura normal de la célula), o con tratamiento con carcinogénicos (sustancia o elemento capaz de incrementar la tasa de mutaciones naturales), por lo que les confiere un nuevo fenotipo. Este tipo de cultivo tiene la característica de ser aneuploides, de no tener inhibición por contacto y de crecer de manera indefinida. El paso de un cultivo primario a una línea celular se denomina transformación, la cual puede inducirse fisiológicamente (interacción celular, polaridad) a través de hormonas como la hidrocortisona.  

 

^	PRINCIPALES TIPOS DE LÍNEAS CELULARES EN MEDICINA VETERINARIA

 

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BHK-21

Monocapa de fibroblastos de riñón de hámster sirio.  

En realidad es un subclón de la línea parenteral establecida en 1961 de  monocapa de células de riñón  obtenida de  cinco hámster  de un día de nacidos.

Es susceptible a los virus de la rabia, pseudorrabia, herpes simple, rubéola, estomatitis vesicular (Indiana), reovirus 3, fiebre aftosa, adenovirus 25, encéfalo-mielocarditis porcina, lengua azul, encefalitis equina del este, peste porcina clásica y enfermedad de Aujeszky.
                           

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MDCK

Monocapa epitelial de riñón canino.

Esta línea es susceptible a los virus de la influenza A y B, fiebre viral porcina, reovirus 2 y 3, estomatitis  vesicular (Indiana), hepatitis y moquillo canino y coxsackie B5.  

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MDBK

Monocapa epitelial de riñón bovino.

Es susceptible a los virus de la estomatitis vesicular, parainfluenza 3, rinotraqueitis infecciosa bovina y diarrea viral bovina.

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PK-15

Monocapa epitelial de riñón porcino.

Línea original: PK-2a  Susceptibilidad a adenovirus 4 y 5 pseudorrabia porcina, estomatitis vesicular (Indiana), fiebre viral porcina, reovirus 2 y 3, Coxsackie B2, B3, B4, B5 y B6,   peste porcina clásica, encéfalo mielocarditis porcina, parvovirus y circovirus porcino y enfermedad de Aujeszky  

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Mc'Coy

Monocapa de fibroblastos de ratón.

Línea original: en sus inicios fue obtenida de fluidos sinoviales en un paciente con artritis degenerativa, pero en la actualidad se obtiene de células de ratones. Es susceptible a  Chlamydia trachomatis.  

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CHO-K1

Monocapa epitelial de ovario de hámster chino.

Línea original: CHO.

Susceptible a estomatitis vesicular (Indiana), arbovirus Getah y meningovirus.

   

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BT

células de turbinato bovino.

Es susceptible a enterovirus y adenovirus bovinos, diarrea viral  y rinotraqueitis infecciosa bovina, parainfluenza 3 y enfermedad de Aujeszky.  

 

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MA 104

Monocapa epitelial del embrión o de riñón de mono verde africano.

Susceptible a rotavirus,  arbovirus y síndrome respiratorio y reproductivo porcino, enfermedad de Aujeszky.

   

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3T3-MSV

Monocapa de tejido embrionario de ratón.

Línea original: 3T3 L1 monocapa de fibroblastos de ratón, transformada por el virus del  Sarcoma Murino (MSV).  

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RK13

Monocapa epitelial de riñón de conejo.

Susceptible a estomatitis vesicular, pseudorrabia, rubéola, el vaccinia,  herpes simple, los herpes B, rinotraqueitis bovina infecciosa, virus de myxoma de conejo, adenovirus del simio, varicela del conejo, mixoma, virus del arteritis viral equina.

   

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HeLa 229

Monocapa epitelial de carcinoma de cervix humano.

Línea original: HeLa  Susceptible a adenovirus 3, sarampión, poliovirus 1, echovirus, vaccinia, arbovirus, virus  sincicial respiratorio, reovirus 3, rinovirus, Coxsackie, estomatitis vesicular (Indiana).  

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E.Derm

Morfología: fibroblástica. dermis de caballo: Es susceptible a: herpes simple, reovirus 3, el  coronavirus, virus de la anemia infecciosa equina, estomatitis vesicular.  

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L-929

Monocapa epitelial de tejido conectivo de ratón:   Morfología:  fibroblástica Susceptible a pseudorrabia, herpes simple, estomatitis vesicular (Indiana).  

         

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CRFK

Monocapa de fibroblastos de riñón de gato.

Morfología: epitelial. Susceptible a picornavirus felino, rabia, parvovirus canino,  inmunodeficiencia felina,  herpes felino,  calicivirus,  panleucopenia felina y reovirus  

   

 

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HEp-2

Monocapa epitelial de carcinoma humano.

Susceptible a adenovirus 3, sarampión, poliovirus 1, echovirus,  herpes simple, arbovirus, estomatitis vesicular
(Indiana), el virus sincicial respiratorio, virus Newcastle.  

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EBTr

Tráquea de embrión bovino:  Morfología: fibroblástica. Es susceptible a herpes simple, parainfluenza 3, el virus de  fiebre de  cerdo, rinotraqueitis infecciosa bovina, reovirus 3,  virus de diarrea bovina, estomatitis vesicular .  

 

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IB-RS-2

Monocapa epitelial de riñón porcino: Susceptible a arbovirus, virus estomatitis vesicular, enfermedad vesicular del cerdo.  

 

Morfología: fibroblástica

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C6/36

mosquito, Aedes Aegypti: Morfología: Epitelial. Larvas del mosquito. Estudios del virus: Arbovirus.  

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Vero

Monocapa fibroblastos de riñón de mono verde africano: Susceptible a poliovirus 3, echovirus, reovirus, rubiola, herpes simple, arbovirus, adenovirus, influenza, paramixovirus, Getah arbovirus, ortomixovirus, virusde la fiebre africana porcina, leucosis bovina, orbivirus, virus de la diarrea epidérmica porcina.  

 

 

^	Bibliografía consultada

Ramírez N; G y Colaboradores. Cultivos Celulares, Elemento Fundamental para la Investigación. Revista ACOVEZ. Colombia.

Técnicas de estudio de líneas celulares. Introducción al cultivo celular. Capitulo 1. (http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/cap1.htm).

American Type Culture Collection (ATCC). 2005.

Reina; M y Auladell; C. Colecciones de Imágenes de células en Cultivo: ATCC / ECACC. "Técnicas de estudio de líneas celulares". Material elaborado para Curso de Doctorado.

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Nota de los editores:

Este artículo fue revisado y avalado por:

Magaly Molina de Garmendia  INIA-CENIAP Sanidad Animal
Magaly Bracamonte INIA-CENIAP Sanidad Animal

Comentarios a este artículo a ceniaphoy@inia.gov.ve  Asunto:CH9  Importancia biológica en la multiplicación de las Líneas celulares estables: III. Tipos y lineas.

Referencia de este artículo:

Duran, R.; Valle, A.; Viña, X.; y Mijica, B. 2005. Importancia biológica en la multiplicación de las lineas celulares estables: III. Tipos y lineas  Revista Digital CENIAP HOY Número 9, 2005.  Maracay, Aragua, Venezuela. URL: www.ceniap.gov.ve/ceniaphoy/articulos/n9/arti/duran_r/arti/duran_r.htm   Visitado en fecha:

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