La Influenza aviar (IA), también conocida como peste de las aves, es causada por un virus de la familia Orthomyxoviridae, existiendo tres tipos: A, B y C. Sólo el tipo A afecta a las aves, pudiendo afectar también a porcinos, equinos y humanos. La infección por el virus de IA ha sido observada en una amplia variedad de aves silvestres y domésticas, siendo en su mayoría infecciones subclínicas; en aves comerciales la infección puede ser subclínica, pero los cuadros clínicos son variables, dependiendo de la cepa del virus, especie, edad y raza del hospedero, infecciones concurrentes, estrés fisiológico y factores ambientales. Las cepas de alta patogenicidad (H5 y H7) producen una enfermedad sistémica con altas mortalidades que pueden llegar a 100%, observándose en algunas ocasiones muerte súbita sin signos clínicos, o mostrar enfermedad respiratoria, edema de la cabeza, cianosis y diarrea, aunque ninguno de estos signos puede ser considerado patognomónico. Estas cepas se han visto involucradas en infecciones en humano causando mortalidad. Específicamente, la H5N1 fue observada por primera vez en 1997 en Hong Kong, por lo que se ha considerado la enfermedad como una zoonosis que en ocasiones puede ser letal.  

Es una enfermedad viral altamente contagiosa, que afecta al sistema respiratorio, gastrointestinal y nervioso de todas las especies de aves, en ocasiones puede afectar otros animales incluyendo al humano. Fue descrita por primera vez en Italia por Perroncito en 1878.

Es producida por un virus del género Influenza virus tipo A, miembro de la familia Orthomyxoviridae (Figura 1), su genoma es un Acido Ribonucléico (ARN) segmentado (ocho segmentos), lo que le permite gran capacidad de recombinaciones, produciendo progenies del virus genéticamente diferentes. Existen tres tipos de virus de Influenza antigénicamente diferentes: A, B y C, clasificación basada en la naturaleza antigénica de dos de sus proteínas estructurales: la nucleoproteína y la proteína de matriz. Los virus tipo A poseen similitud antigénica y pueden afectar a cerdos, equinos, aves y humanos; los virus B y C son muy diferentes al tipo A y afectan sólo a los humanos. 

Figura 1. Virus de Influenza Aviar. Tomado de  Diseases of poultry 10nd ed, 1997

Según sus proteínas de membrana Hemaglutininas (HA) y Neuroaminidasas (N), los virus se han clasificado antigénicamente en subtipos, reconociéndose hasta ahora 16 hemaglutininas (H1-H16) y 9 neuraminidasas (N1-N9), pudiendo ocurrir 144 combinaciones posibles. Todos los subtipos han sido identificados en aves, pero la gran mayoría de éstos causan enfermedad de baja patogenicidad. Los subtipos que han causado brotes de alta patogenicidad contienen las hemaglutininas H5 y H7, aunque estos pueden presentarse como cepas de baja patogenicidad y luego cambian a alta patogenicidad.

La enfermedad puede extenderse de un país a otro a través del comercio internacional de aves de corral vivas o el comercio ilegal de aves mascotas o de riña. Las aves migratorias pueden transportar el virus a grandes distancias y están implicadas en la expansión internacional de la enfermedad.  

La aparición y desarrollo de la enfermedad es muy variable y depende de factores como la patogenicidad del virus, estado inmunológico del hospedero, condiciones ambientales, entre otros. En brotes de baja patogenicidad, los signos pueden ser tan leves que muchas veces pueden pasar desapercibidos, pero comúnmente se observan plumas erizadas, disminución en la producción de huevos, dificultad respiratoria, descarga nasal y ocular, diarrea, aumento de mortalidad, edema de la cabeza, cresta y cloaca (Figura 2), ocasionalmente uratos en riñones y peritonitis. En cepas de alta patogenicidad su aparición es súbita y estos signos son acompañados por alta mortalidad, muy cercana a 100%, hemorragias en órganos y cianosis. Si la enfermedad es hiperaguda sólo se observa muerte súbita, sin la presencia de signos clínicos.

Figura 2. Ave con signos clínicos

Las aves acuáticas migratorias, principalmente los patos, constituyen el reservorio principal de los virus de la gripe aviar, y son también las más resistentes a la infección. Aunque todas las especies de aves son susceptibles de infectarse, las aves de corral domésticas son especialmente vulnerables, en particular los pollos y pavos.

Se ha considerado el contacto directo o indirecto de los animales domésticos con las aves acuáticas migratorias como causa frecuente de epidemias. El mercado de aves vivas juega también un papel importante en la expansión de epidemias.

Por otra parte, investigaciones recientes han puesto de manifiesto que virus de baja patogenicidad pueden mutar a virus muy patógenos, después de circular por periodos cortos entre la población de aves de corral.  

Son muy variables y dependen en gran parte de la especie afectada y de la patogenicidad de virus infectante. En cepas de mediana patogenicidad se puede observar inflamación catarral serofibrinosa y fibrinosa en senos; edema en tráquea con secreción serosa y ruptura de óvulos en la cavidad ocasionando peritonitis, enteritis catarral o fibrinosa .

Las cepas de alta patogenicidad pueden producir congestión y hemorragia transudativa, con cambios necróticos en órganos como tráquea, proventrículo, intestinos, cloaca, óvulos (Figura 3), focos necróticos en hígado, bazo y riñón congestión y hemorragia subcutánea en muslos y patas. En aves con muerte súbita no se observan lesiones aparentes en órganos.  

Figura 3, Hemorragia en órganos

Edema, hiperemia, hemorragia y acumulo linfoide perivascular con degeneración y necrosis parénquimal en miocardio, cerebro, bazo y riñón. Acumulo linfoide perivascular, proliferación vascular, necrosis focal y cambios neuronales en cerebro. Algunas cepas pueden producir pancreatitis severa. Las lesiones varían de acuerdo con la especie y la cepa infectante.

 Se realiza a través del aislamiento viral en huevos embrionados y la detección serológica de anticuerpos específicos. La detección del virus de IA se realiza por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa RT-PCR (siglas en inglés) de tiempo real, y en algunas ocasiones, debido a la premura con que se debe realizar el diagnóstico, ha reemplazado el aislamiento viral como primera opción. Pero este resultado debe ser corroborado por el aislamiento viral y su posterior caracterización.  

Se deben tomar muestras de tráquea, pulmón, intestino y/o contenido intestinal y cerebro en la fase aguda de la enfermedad. La médula ósea debe ser tomada cuando las aves son encontradas muertas, y deberán ser conservadas en congelación hasta su procesamiento. En aves vivas, las muestras a tomar son hisopados traqueales, hisopados cloacales, heces y suero. Todas las muestras serán tomadas por separado y deberán estar bien identificadas.

No se deben hacer pool de órganos de diferentes aves, lo ideal es procesar las aves separadamente, y por sistemas: respiratorio, nervioso y gastrointestinal.

Se realiza en embriones de pollo de 9 a 11 días de edad libres de anticuerpos específicos contra el virus (SPF), utilizando la cavidad alantoidea como ruta de inoculación (Figura 4).

Figura 4. Inoculación en embrión de pollo

• Se realiza un macerado de los tejidos (respiratorio, entérico y nervioso por separado), agregando solución de caldo triptosa buferada o PBS (solución salina fosfatada buferada) con antibióticos (penicilina 10.000 UI/ml, estreptomicina 2000-10000ug/ml, gentamicina 1000ug/ml, kanamicina 650 ug/ml y anfotericina B 5-20 ug/ml) (Figura 5).

Figura 5.   Preparación del inóculo

• El macerado es centrifugado a 1500 xg por 20 minutos, y filtrado con un filtro de membrana de poro Nº 0.45 nm, obteniendo de esta manera el inoculo.

• Se realiza control de esterilidad del inóculo sembrando en gelosa simple o agua peptonada para descartar contaminación bacteriana.

• El inóculo se conserva en congelación a –7 ºC hasta el momento de la inoculación.

• Se inoculan de 5 a 10 embriones,  vía cavidad alantoidea con 0,1 a 0,2 ml del inoculo obtenido, cinco embriones se dejan como control.

• Los embriones son incubados a 37ºC por 7 días y revisados 2 veces al día mediante el ovoscopio para descartar muerte embrionaria.

• Los embriones que mueran en las primeras 24 horas son descartados, ya que se considera  muerte por traumatismo o por contaminación.

• Los embriones muertos después de las 24 horas se les deberá cosechar el fluido alantoideo (FA), probando la actividad hemoaglutinante (HA) colocando en una lámina portaobjeto una gota de FA y una gota de sangre al 5%. Si ocurre hemoaglutinación positiva, la misma deberá ser inhibida con un suero hiperinmune específico contra el virus de IA (Figura 6), igualmente se deberá hacer control de esterilidad para comprobar que el FA está libre de bacterias. Los FA que resultan negativos a la HA, se le hará por lo menos un pasaje ciego en huevos embrionados. De no haber mortalidad a las 72 horas, los embriones serán cosechados vivos (recolectándose no mas de 1 ml/embrión) y evaluado el FA de la misma manera.

• El fluido alantoideo HA positivo (que contiene el virus de IA) es centrifugado a 1500 xg. por 15 minutos y filtrado respectivamente, y será conservado en congelación a –70ºC hasta su uso. Éste será posteriormente caracterizado mediante pruebas de Patogenicidad y/o Biología Molecular.

Figura 6. Prueba de Hemoaglutinación positiva para el virus de IA.

Para determinar la patogenicidad de la cepa es necesario realizar el Índice de Patogenicidad Intravenoso (IPIV).  

Se inoculan 8 pollos de 6 semanas de edad por vía intravenosa o intramuscular, con 0,1 ml de una dilución 1/10 del FA. Se observan diariamente por 10 a12 días y se llevan los registros de mortalidad, parálisis, signos y aves normales, a los cuales se les da un valor de 3, 2, 1 y 0 respectivamente.

                IPIV = 98/88    =  1.11                        IPIV =    1.11

Cepas de alta patogenicidad: cuando el IPIV resulte mayor o igual a 1,2 o cuando mueran al menos 6 aves de las 8 inoculadas.

La detección de anticuerpos se realiza mediante las pruebas de ELISA e Inmunodifusión en Agar Gel (AGID), siendo ésta última la prueba de oro. Para la identificación de los subtipos se realiza la prueba de Inhibición de la Hemoaglutinación (HI) para cada una de las 16 Hemoaglutininas, e Inhibición de las Neuroaminidasas (NI) para cada una de las nueve Neuroaminidasas.

Principalmente enfermedad clínica respiratoria producida por cepas del virus de la Enfermedad de Newcastle, Laringotraqueitis y Bronquitis Infecciosa Aviar, cuyo diagnóstico depende del aislamiento e identificación viral.

Las medidas de control más importantes son la rápida eliminación de todas las aves expuestas o infectadas, destrucción apropiada de cadáveres, cuarentena y rigurosa desinfección de granjas. El calor (56ºC durante 3 horas o 60ºC durante 30 minutos) y los desinfectantes comunes como la formalina, los compuestos yodados y aquellos a base de glutaraldehido inactivan el virus. Otra importante medida de control es la restricción del movimiento de las aves de corral dentro del país y entre países. En algunos países el control es realizado por vacunaciones combinado con estrictas medidas de bioseguridadd

En Venezuela hasta el momento no se ha aislado el virus de IA ni tampoco se han detectado anticuerpos específicos contra este virus. Actualmente los estudios para la detección del virus de IA se están conduciendo en el laboratorio de Patología Aviar del INIA-Sanidad Animal, como apoyo al plan de contingencia para la vigilancia epidemiológica de IA en Venezuela, el cual esta enmarcado dentro del programa de alerta, prevención y detección del virus de IA recomendado por la OMS para el continente.

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